CFT (Complement Fixation Test) dan Fluorescent Antibody Test (FAT)

1. CFT (Complement Fixation Test)

            CFT adalah tes medis imunologi yang dapat digunakan untuk mendeteksi adanya antibodi spesifik atau antigen spesifik dalam serum. Secara luas digunakan untuk mendiagnosa infeksi, terutama dengan mikroba yang tidak mudah terdeteksi oleh metode budaya, dan penyakit rematik. Namun, di laboratorium diagnostik klinis sebagian besar telah digantikan oleh metode serologis lain seperti ELISA dan dengan DNA berbasis metode deteksi patogen, terutama PCR.

            Sistem CFT adalah sistem protein serum yang bereaksi dengan antigen-antibodi kompleks. Jika reaksi ini terjadi pada permukaan sel, maka akan mengakibatkan pembentukan trans-membran pori-pori dan karena penghancuran sel. Langkah-langkah dasar dari tes fiksasi komplemen adalah sebagai berikut:

1. Serum diisolasi dari pasien.

2. Pasien secara alami memiliki tingkat yang berbeda dari protein komplemen dalam serum mereka. Untuk meniadakan efek ini mungkin pada tes, protein komplemen dalam serum pasien harus dihancurkan dan diganti dengan jumlah yang diketahui dari protein komplemen standar. Serum dipanaskan sedemikian rupa sehingga semua pelengkap protein hancur tapi tidak ada antibodi-dalamnya dihancurkan. (Hal ini dimungkinkan karena protein komplemen jauh lebih rentan terhadap kerusakan oleh panas dibandingkan antibodi). Sejumlah protein komplemen standar yang diketahui ditambahkan ke serum. (Protein ini sering diperoleh dari serum marmut).

3. Antigen penting ditambahkan ke serum.

4. Sel darah merah domba (sRBCs) [2] yang telah pra-terikat untuk anti-sRBC antibodi ditambahkan ke serum. Tes ini dianggap negatif jika hasilnya berubah merah muda seketika dan positif sebaliknya.

2. Fluorescent Antibody Test (FAT)

            adalah test menandai antibodi secara langsung (direct fluorescent antibody (DFA or dFA)). Namanya berasal dari kenyataan bahwa itu langsung menguji adanya antigen dengan antibodi ditandai, tidak seperti western blotting, yang menggunakan metode deteksi tidak langsung, di mana antibodi primer mengikat antigen target, dengan antibodi sekunder ditujukan terhadap primer, dan tag melekat pada antibodi sekunder.

Komersial DFA kit pengujian yang tersedia, yang mengandung antibodi berlabel fluorescently, dirancang untuk secara khusus menargetkan antigen yang unik hadir dalam bakteri atau virus, tetapi tidak hadir pada mamalia (Eukariota). Teknik ini dapat digunakan untuk dengan cepat menentukan apakah subjek memiliki infeksi virus atau bakteri tertentu.

Dalam kasus virus pernapasan, banyak yang memiliki gejala yang luas yang sama, deteksi bisa dilakukan dengan menggunakan sampel mencuci hidung dari subjek dengan infeksi dicurigai. Meskipun sel-sel shedding pada saluran pernapasan dapat diperoleh, sering dalam jumlah yang rendah, sehingga metode alternatif dapat diadopsi di mana kultur sel kompatibel dapat terkena terinfeksi sampel mencuci hidung, sehingga jika virus hadir dapat tumbuh untuk jumlah yang lebih besar, yang kemudian dapat memberikan pembacaan yang lebih jelas positif atau negatif.

Seperti dengan semua jenis mikroskop fluoresensi, panjang gelombang serapan yang tepat perlu ditentukan dalam rangka untuk merangsang tag fluorophore melekat pada antibodi, dan mendeteksi fluoresensi yang dilepaskan, yang menunjukkan sel-sel yang positif untuk kehadiran virus atau bakteri yang terdeteksi.

sumber: http://wikipedia.org